18视频在线观看娇喘-日本中文在线-中文天堂网-国产精品福利视频-日本在线中文-性网址-天天综合在线观看-成年人的黄色片-久久久久久久久久电影-在线色站-久久成人一区二区-日韩中出在线-夏目彩春娇喘呻吟高潮迭起-女同视频网站-999精品免费视频-亚洲成年人专区-亚洲作爱视频-黄色特级网站-精品久久免费观看-伊人一道本-汗汗视频-久久美女免费视频-wwww.国产-美女激情视频网站-免费a级黄毛片

產品中心PRODUCTS CENTER
技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > Tissuelyser-48利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA

Tissuelyser-48利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA

更新時間:2024-03-06   更新時間:2024-03-06   點擊次數:3816次
  利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA(以下內容只是簡單介紹,詳細情況,可咨詢本公司,)
  一、實驗試劑:
  1.CTAB抽提液:
  2%(w/v)CTAB
  100mmol/LTris-HCl(pH8.0)
  20mmol/LEDTA(pH8.0)
  1.4mol/LNaCl
  抽提含多酚較多的植物材料時(比如木本植物),上述抽提液中可另加入2%的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。
  抽提液于室溫保存,可在幾年內保持穩定。臨用之前向裝有上述抽提液的試管中加入約2%-3%(v/v)的β-巰基乙醇。
  2、醋酸鈉:
  3mol/LNaAc
  用冰乙酸調pH值至4.8-5.2。
  3、TE溶液:
  4、其它:
  無水乙醇,異丙醇,75%乙醇,酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),氯仿:異戊醇(24:1),β-巰基乙醇,重蒸水。

組織研磨

  二、實驗步驟

  1.樣品研磨
  1)取1g的樣品放入2mlepp管中
  2)加入1-2粒5mm研磨珠
  3)加入1ml的CTAB抽提液
  4)將加有樣品的epp管放入多組織研磨儀的適配器中,蓋好
  5)將研磨頻率調到60Hz,設定研磨時間為90秒(可根椐樣品的研磨的難易程度來調節,此數據是以銀杏落葉為樣本得出)
  6)啟動研磨儀對樣品進行研磨(根據不同的樣品,本身性質不同,需要對研磨頻率和研磨時間進行適當的調整)
  2.DNA的粗提
  1)將研磨好的樣品取出于65℃水浴45min,中途間隔(輕柔)振蕩三次混勻
  2)冷卻后加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),輕柔顛倒混勻使乳化10min
  3)7000g-8000g離心10min(18-20℃)
  4)吸取上清于另一干凈的離心管中
  5)(根據需要可用氯仿:異戊醇如上法重復抽提一次,吸取上清)
  6)加入與上清液等體積(且已于-20℃預冷的異丙醇,顛倒混勻,約1至2分鐘后應有白色絮狀沉淀出現(若沒有,則加入上清液1/5至1/10體積的pH4.8-5.2的3MNaAc,混勻,于-20℃冰箱中沉淀30min)
  7)離心法沉淀DNA
  8)在75%乙醇中漂洗DNA數分鐘以上,用Tip頭吸干乙醇
  9)用1ml75%乙醇再漂洗一次
  10)沉淀于室溫或64℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現半透明,不要過度干燥
  11)用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。

組織研磨

  3.DNA的純化

  1)向TE溶解的DNA粗提物中入4-10μlRNaseA(約40-100μg)
  2)于37℃酶解RNA1hr或65℃酶解RNA30min以上
  3)加入50μl酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕輕顛倒混勻10min
  4)10000g以上常溫離心10min,吸取上清
  5)加入50μl仿氯:異戊醇(24:1)輕輕顛倒10min
  6)10000g以上常溫離心10min,吸取上清(根據需要可重復用氯仿:異戊醇如上法再抽提1-2次,以充分去除蛋白和酚)
  7)向上清中加入1/5-1/10體積的pH4.8-5.2的3MNaAc,并加入2.5倍體積無水乙醇,于-20℃沉淀30min以上
  8)12000g、4℃低溫離心10min,吸干液體
  9)沉淀用75%乙醇漂洗二次
  10)沉淀于室溫或64℃以下恒溫箱中干燥片刻至剛開始出現半透明狀,勿過度干燥加入50μl重蒸水溶解DNA,可于65℃水浴助溶
  11)取5μlDNA電泳檢查DNA的質量
  12)100-500倍稀釋后于分光光度計上測定OD260及OD280,分析DNA的濃度和質量
  13)保存DNA于-20℃
  補充:如果需要提取的樣品比較多(比如1g),研磨好的樣品在后續的提取中,需要轉移到大的epp管中,研磨時可以加入較少的抽提液,研磨完畢按照1g樣品10ml提取液補充抽提液,進行后續的操作。




主站蜘蛛池模板: 性生活视频网站 | 91国产精品 | 人人艹人人 | 日韩一区二区三区四区 | av香蕉| 黄在线观看| 老熟妇一区二区三区啪啪 | 国产一级18片视频 | 黄网站在线观看 | 国产高清一区 | 欧美日韩一区二区三区四区 | 名校风暴在线观看免费高清完整 | 韩日在线 | 99人妻碰碰碰久久久久禁片 | 99久久99 | www.香蕉视频 | 日韩中文字幕电影 | 久草精品在线 | 亚洲人成在线观看 | 国产精品资源 | 国产精品丝袜 | 国产伦精品一区二区三区 | 国产免费一区二区 | 成人网址在线观看 | 奇米狠狠去啦 | 美女激情av | 亚洲激情综合网 | 成人网站免费观看 | 爱草视频| 亚洲精品久久久久久久久久久 | 成人黄色小视频 | 久久国产电影 | 国精产品一区一区三区有限公司杨 | 日本午夜影院 | 91丝袜一区二区三区 | 波多野结衣人妻 | 制服丝袜在线播放 | 天天操操 | 在线色| 亚洲欧美视频 | 午夜激情在线 | 91九色在线| 亚洲精品久久久久中文字幕二区 | 久久久精品| 午夜网| 伊人视频 | 欧美无人区码suv | a黄色片| 日本全黄裸体片 | 日韩欧美色图 | 国产做受麻豆动漫 | 亚洲在线观看视频 | 国产日韩欧美在线 | 国产传媒一区二区三区 | 中文字幕一区二区在线观看 | 波多野结衣av无码 | 欧美aaaaa| 天天色视频 | 少妇特黄a一区二区三区 | 强行糟蹋人妻hd中文字幕 | 波多野结衣av在线观看 | 国产视频第一页 | 911精品国产一区二区在线 | 亚洲色图一区二区 | 毛片毛片 | 亚洲综合第一页 | 成人激情视频 | www国产亚洲精品久久网站 | 一本色道久久综合亚洲精品酒店 | 久久亚洲精品视频 | 午夜精品偷拍 | 亚洲一区在线视频 | 91精品人妻一区二区三区蜜桃欧美 | 一区二区三区在线观看 | 欧美亚洲 | 成人激情视频在线观看 | 国产免费一区二区 | www.成人| 国产福利91精品一区二区三区 | 蜜桃av一区二区三区 | 国产国语老龄妇女a片 | 人人妻人人澡人人爽人人dvd | 日韩视频免费观看 | 日本黄色录像 | 无码成人精品区一级毛片 | 色爽av | 亚洲精品色 | 国产不卡在线观看 | 在线色 | 日本欧美久久久久免费播放网 | 麻豆视频免费在线观看 | 久久午夜影院 | 国产精品一区二区三区四区 | 亚洲福利在线观看 | 丰满少妇一区二区三区 | 中文字幕国产 | 在线播放中文字幕 | 久久久影院 | 亚洲免费在线观看视频 |